Автоматизированное исследование агрегации тромбоцитов (с применением агрегометра)

Автоматизированное исследование агрегации тромбоцитов (с применением агрегометра).

Данный вид методов дает возможность дать наиболее полную оценку агрегационной способности тромбоцитов , поскольку в основе лежит количественная фотометрическая или спектрофотометрическая регистрация процесса агрегации при помощи агрегографов различной конструкции. Такие приборы осуществляют графическую регистрацию изменения оптической плотности тромбоцитарной плазмы при перемешивании ее со стимуляторами агрегации (рис. 16). Образование тромбоцитарных агрегатов ведет к увеличению светопропускающей способности тромбоцитарной плазмы.

Рисунок 16. Прибор для автоматизированного исследования агрегации тромбоцитов .

Методы и лежащие в их основе принципы.

а) турбидиметрический метод Борна основан на регистрации изменений светопропускания обогащенной тромбоцитами плазмы, что позволяет исследовать не только агрегацию, но и изменение формы тромбоцитов . Однако изменение формы может маскировать начальный этап агрегации, а образование малых агрегатов (50-100 тромбоцитов ) может вообще не сказываться на светопропускании суспензии.

б) ФСП-метод исследования агрегации тромбоцитов основан на анализе флуктуаций светпропускания (ФСП), вызванных случайным изменением числа частиц в оптическом канале. Относительная дисперсия таких флуктуаций пропорциональна среднему размеру агрегатов и используется для исследования кинетики агрегации. Метод отличается высокой чувствительностью, что делает его пригодным для исследования спонтанной агрегации и агрегации под действием низких концентраций индукторов. Развитие этого метода позволило также измерять концентрациючастиц в перемешиваемой суспензии.

Примером является использование двухканального лазерного анализатора агрегации тромбоцитов /счетчика LA220/230 (НФП БИОЛА, Россия). Данный прибор отличается от обычного турбидиметрического агрегометра, главным образом, наличием фильтра высоких частот и двухполупериодным выпрямителем, что позволяет использовать как стандартный турбидиметрический метод, так и ФСП-метод исследования агрегации тромбоцитов . Прибор выпускается в нескольких исполнениях: 220 LA выполняет измерение агрегации вышеописанными методами; 230LAимеет дополнительно функцию определения концентрации тромбоцитов (также ФСП-методом). Возможность определения концентрации тромбоцитов непосредственно при исследовании их агрегационной способности создает ряд преимуществ: с одной стороны, предоставляет полную диагностическую информацию, с другой – дает возможность определять агрегацию при стандартной концентрации тромбоцитов в плазме (200 тыс/мкл).Модель 230 LA-2 наряду с вышеперечисленными возможностями позволяет определять фактор Виллебранда; метод основан на исследовании агглютинации фиксированных тромбоцитов .

Агрегометры БИОЛА 230 LA подключаются к компьютеру. Программное обеспечение AGGR 2.41 удобно в работе и легко осваивается. Агрегограммы хранятся в памяти компьютера вместе с данными о пациенте. Это позволяет проводить анализ изменений показателей агрегации как у пациентов, находящихся на лечении в стационаре, так и у амбулаторных больных.

Результаты автоматизированного измерения агрегации тромбоцитов представлены на рисунке 17.

Рисунок 17. Результаты автоматизированного определения агрегации тромбоцитов (пояснения в тексте).

Полученные агрегатограммы анализируют по нескольким количественным параметрам: временя начала агрегации после добавления соответствующего стимулятора, амплитуда агрегатограммы на 2-й и 6-й минутах, общая площадь агрегатограммы и др. При использовании в качестве стимулятора агрегации тромбоцитов коллагена, тромбина, ристомицина регистрируют одну большую волну агрегации, а при добавлении к тромбоцитарной плазме малых доз АДФ – двухволновую агрегатограмму (рис.17а).

На нормальных агрегатограммах, полученных при использовании в качестве стимулятора малых доз АДФ, 1-я волна регистрируемой кривой отражает начальную агрегацию тромбоцитов , обусловленную введением извне стимулятора этого процесса. 2-я волна связана с реакцией высвобождения из тромбоцитов собственных биологически активных веществ (адреналина, АДФ, тромбоксана А₂ и др.), которые усиливают начавшуюся агрегацию кровяных пластинок.

Большое значение в последние годы придают существованию тромбоцитопатий с нарушением реакции высвобождения, к которым, по-видимому, относится большая часть встречающихся во врачебной практике «необъяснимых» форм кровоточивости. При таких патологиях агрегатограмма демострирует отсутствие 2-й волны агрегации и раннюю дезагрегацию тромбоцитов (рис. 17б).

При тромбастении Гланцмана в мембранах кровяных палстинок отсутствуют специфические рецепторы (гликопротеинов IIb и IIIa), необходимые для взаимодействия этих клеток со стимуляторами агрегации и фибриногеном. При этом резко нарушен процесс агрегации тромбоцитов под влиянием АДФ, адреналина и коллагена (рис. 17в).

Охарактеризовать морфологические особенности нейтрофилов и их предшественников.

Анализатор функции тромбоцитов Multiplate ®

Анализатор Multiplate® может использоваться для персонализации антитромбоцитарной терапии и/или стратификации риска развития кровотечения с помощью малых образцов цельной крови.

Тромбоциты играют ключевую роль в физиологии гемостаза. Нарушения функции тромбоцитов в целом проявляются наиболее отчетливо как кровотечения или тромбозы, поэтому тестирование функции тромбоцитов может быть востребовано, как при анализе наследственных, так и приобретенных нарушений этой функции. Анализатор Multiplate® выявляет такие нарушения и может использоваться для диагностики и ведения пациентов с этой патологией. 2,3

Анализатор Multiplate® также можно использовать для контроля ответа на терапию антитромбоцитарными препаратами и при подборе таких препаратов. 4 Данные в рамках первого крупного рандомизированного контролируемого клинического исследования (TROPICAL ACS), продемонстрировавшего безопасность и эффективность изменений схем приёма препаратов на основе определения функции тромбоцитов, были получены на анализаторах Multiplate®. 5 В исследовании TROPICAL-ACS пациенты с острым коронарным синдромом, перенесшие чрескожное коронарное вмешательство (ЧКВ), принимали либо одну неделю прасугрел, затем неделю клопидогрел, а после ЧКВ назначались клопидогрел или прасугрел, либо только прасугрел всё время. При таком подходе не было выявлено различий по числу коронарных событий и случаев развития кровотечений в обеих группах. Выводы авторов исследования: «Направленная деэскалация антиагрегантной терапии не уступала стандартной терапии прасугрелом через 1 год после ЧКВ с точки зрения клинического эффекта». Следовательно, ранняя деэскалация антиагрегантной терапии прасугрелом и переход на клопидогрел, как показывают результаты анализа функции тромбоцитов Multiplate®, может стать одним из альтернативных подходов к стандартным методам лечения. 5

Анализатор Multiplate® может также использоваться в качестве предоперационного и / или периоперационного тестирования для прогнозирования кровотечения и для мониторинга эффективности различных типов гемостатических методов лечения. 6-9 Исследования показали, что результаты исследований, проведенных на Multiplate® в сочетании с клинической картиной и дополнительными лабораторными показателями могут быть использованы для определения даты оперативного вмешательства после прекращения антиагрегантной терапии. 10, 11 Результаты Multiplate® также могут быть использованы для оценки периоперационной функции тромбоцитов и могут быть интегрированы в протокол трансфузии, чтобы снизить частоту переливания тромбоцитарной массы, а значит, риски потенциальных осложнений этой процедуры. 12 К тому же, снижение частоты этой процедуры экономически выгодно.

Структура центра

Клинико-диагностическая лаборатория центра – централизованная служба центра, удовлетворяющая потребности в лабораторной диагностике и мониторинге за лечением пациентов. Лаборатория проводит обследование как стационарных, так и амбулаторных пациентов. Организована круглосуточная работа экспресс лаборатории.

Клинико-диагностическая лаборатория центра, оснащенная современным оборудованием ведущих мировых производителей и штат квалифицированных сотрудников (врачей клинической лабораторной диагностики, лабораторных техников, медицинских технологов), проводит лабораторные исследования, имеющие высокую аналитическую и диагностическую надежность. Лаборатория Центра проводит все известные виды клинических лабораторных исследований:

• общеклинические;
• гематологические;
• биохимические;
• коагулогические;
• иммунологические;
• цитологические;
• микробиологические.

Общеклинические исследования

Выполняются исследования мочи, транссудата и экссудата, суставной и спинномозговой жидкости и др. Общий анализ мочи проводится на автоматическом анализаторе CombiScan 500 (Германия) методом сухой химии по следующим параметрам: удельный вес, рН, лейкоциты, нитриты, белок, глюкоза, кетоны, уробилиноген, билирубин, эритроциты, аскорбиновая кислота. Производительность анализатора не менее 700 тестов в час. Методика является скрининговой. Микроскопия мочевого осадка, ликвора, суставной жидкости раздел проводится на современном микроскопе Leica DME (Германия) с использованием одноразовых стандартизированных систем (слайт-планшетов).

Гематологические исследования

Стандартный общий анализ крови выполняется на автоматическом гематологическом анализаторе ХТ 2000i Сисменс Корпорейшн (Япония) по 30 параметрам: показатели красной крови, лейкоцитарного и тромбоцитарного ростка, расчетные показатели объема эритроцитов и содержания гемоглобина, графики распределения эритроцитов и тромбоцитов по объему, количество ретикулоцитов, атипичных лимфоцитов, больших незрелых клеток, лейкоцитарная формула и т.д. Более подробное исследование лейкоцитарной формулы, пунктата костного мозга проводится на оснащенном цифровой системой анализа компьютерном микроскопе с программным обеспечением и возможностью документирования Leica DM 3000 (Германия). Определение СОЭ проводится в соответствии с международными стандартами методом Вестергрена на автоматическом анализаторе Mix-Rate X 100 (Германия), что позволяет сократить время выдачи результата общего анализа крови до 30 мин.

Биохимические, коагулогические исследования

Биохимические исследования проводятся на автоматическом биохимическом анализаторе Сапфир-400 (Япония), позволяющим определять 240 тестов в час и работать непрерывно в течение 24 часов, по следующим параметрам:

• ферменты (щелочная фосфатаза, кислая фосфатаза и простатическая фракция, амилаза, амилаза панкреатическая, трансаминазы, креатинкиназа и MB-фракция, гидроксибутерат, ГГТП, холинестераза, липаза, ЛДГ, G6P-DH, альдолаза);
• метаболиты и другие аналиты (альбумин, общий белок, мочевина, мочевая кислота, билирубин общий и прямой, холестерин общий, холестерин высокой и низкой плотности, триглицериды, фосфолипиды, глюкоза, фруктозамин, лактат, аммиак, микропротеин);
• металлы и ионы (кальций, железо и железосвязывающая способность, медь, цинк, хлориды, фосфор, магний, калий, бикарбонаты, K, Na, Cl, литий);
• иммунотурбидиметрия (IgA, IgG, IgM, C3, C4, CRP, ASLO, RF, 2-микроглобулин, аполипопротеины, ферритин, LP(a), 1-антитрипсин, гаптоглобин, церулоплазмин, 1-гликопротеин и др.) лекарственный мониторинг;
• мониторинг наркотических веществ;
• гликолизированный гемоглобин (hba1c), чувствительный crpsen, ферритин, микроальбумин(в моче), литий, желчные кислоты;
• определение антиоксидантного статуса (4 теста).

Анализ кислотно-основного состояния и электролитов проводится на автоматическом анализаторе GEM Premier 3000 Instrumentation Laboratory (США), который позволяет исследовать не менее 44 проб в час по следующим параметрам: рН, рСО2, рО2, гемоглобин, гематокрит, лактат, SO2 %, натрий, калий, кальций, хлор, глюкоза.

Исследование белкового обмена с выделением белковых фракций сыворотки крови выполняется на автоматическом анализаторе для количественного электрофореза белков Minicap Sebia (Франция)

Осмотическое давление крови определяется с помощью осмометра Vapro (США), онкотическое давление белков плазмы – с помощью коллоидного осмометра Osmomat 50 Gonotec (Германия).

Автоматический иммунохимический анализатор Elecsys 2010 производства Ф.Хоффманн-Ля Рош Лтд. (Германия) позволяет определять большой диапазон исследований: онкомаркеры, гормоны (пролактин, ФСГ, эстрадиол, прогестерон, тестостерон, инсулин, с-пептид, кортизол, гормоны щитовидной железы), маркеры инфекционных болезней, кардиомаркеры, маркеры костного обмена, диагностика анемий, сепсиса, ревматоидного артрита. Возможно производить как большое число исследований, так и единичные, в том числе в режиме «срочно».

Автоматический анализатор гемостаза ACL 9000 Instrumentioh Laboratory (США) позволяет выполнять большой диапазон исследований: параметры свертывающей системы (АЧТВ, протромбиновое время, тромбиновое время, фибриноген), антикоагулянтной системы (антитромбин III, протеины С и S), фибринолитической системы (Д-димер, плазминоген, тканевый активатор плазминогена, антиплазмины), диагностика тромбофилических состояний (волчаночный антикоагулянт, резистентность V фактора и тд,), ДВС-синдрома. Методы исследований: клоттинговый, хромогенный, иммунологический.

Для исследования тромбоцитарного звена гемостаза, контроля за действием антиагрегантов, определения спонтанной агрегации имеется лазерный анализатор агрегации тромбоцитов Биола (Россия). Исследования проводятся с помощью агонистов: АДФ, коллагена, адреналина, ристомицина.

Для интегральной результирующей оценки всех звеньев гемостаза используется новый современный метод –тромбоэластография на автоматическом тромбоэластографе TEG 5000(США).

Метод позволяет оценить по графическому изображению состояние и взаимодействие всех составляющих системы гемостаза с момента образования первых нитей фибрина, активации тромбоцитов до полного лизиса сгустка, а также эффект от назначения лекарственных препаратов (антикоагулянтов, дезагрегантов, фибринолитиков).

Иммуно-ферментные исследования

Широкий спектр исследований выполняется на автоматическом иммуно-ферментном анализаторе Immulit E 1000 DPC (США), позволяющем проводить до 120 тестов в час, время проведения теста – от 42 до 72 минут. Система полностью автоматизирована: от отбора проб до измерения результатов; пробирочная технология дает возможность выполнения как единичных, так и серийных исследований. Диапазон исследований:

• маркеры функционального состояния щитовидной железы;
• маркеры функционального состояния репродуктивной системы и мониторинг беременности;
• маркеры функционального состояния поджелудочной железы и диагностика диабета;
• маркеры функционального состояния надпочечников;
• маркеры функционального состояния костной ткани (диагностика остеопороза);
• оценка соматотропной функции гипофиза;
• маркеры функционального состояния сердечно-сосудистой системы (креатинкиназа МБ, миоглобин, тропонин, гомоцистеин, Д-димер);
• диагностика анемии (В12, фолиевая кислота, ферритин, эритропоэтин);
• маркеры инфекционных заболеваний (TORch-инфекции, гепатит В, хеликобактерная инфекция);
• определение цитокинов и маркеров воспаления;
• диагностика аллергии;
• лекарственный мониторинг.

Лаборатория срочных исследований

Для быстрой выдачи результатов оборудование представлено современными автоматическими и полуавтоматическими анализаторами: автоматический гематологический анализатор Сисмекс 1800 (Япония), гемаглобинометр, полуавтоматические биохимические экспресс-анализаторы Microlab 300 Vital Scientific (Нидерланды) и Clima MC 15 (Испания), автоматический анализатор КЩС GEM Premier 3000 (США), полуавтоматическиt портативные коагулометры CL Instrumentation Laboratory (США) и HumaClot (Германия), иммунохимический экспресс-анализатор Кардиак Ридер Roche (Швейцария), автоматический глюкометр EcoSolo II (Германия), микроскопы фирмы Leica, высокооборотные центрифуги фирмы Beckman Coulter (США).

Иммуногематологические исследования

Для определения группы крови, резуспринадлежности, фенотипа, иммунных антител используется гелевая технология Скангель (Био-Рад). Это признанное удобство, высокотехнологичный процесс, стабильность и объективность результатов исследований, высокая чувствительность и специфичность по сравнению со стандартными исследованиями, автоматическая интерпретация результатов, стандартизация учета результатов. Весь процесс разработки и производства сертифицирован по ISO 9001.

Микробиологические исследования

Диагностика септических состояний производится на автоматическом бактериологическом анализаторе Bact/ Alert 3D 60 по контролю стерильности крови и других биологических жидкостей. Микроскопический анализ интраоперационного материала (бактериоскопия) производится с помощью компьютерного микроскопа Leica DM 3000.

©2010-2013 Федеральный центр травматологии, ортопедии и эндопротезирования

Биола АЛАТ-2 Анализатор гемостаза

Medeq — надёжная компания с выручкой более 1.6 млрд руб.

Гибкие условия финансирования покупки

Отслеживание заказа онлайн

Анализаторы агрегации АЛАТ-2 от НПФ Биола предназначены для исследования агрегации тромбоцитов и других клеток, определения концентрации клеток в суспензии, а также оценки их формы. Агрегация регистрируется как традиционным турбидометрическим методом, так и недавно разработанным методом, основанным на оценке среднего размера агрегатов в реальном времени.

Турбидометрический метод, предложенный Борном и О’Брайеном, является в настоящее время наиболее распространенным при исследовании агрегации тромбоцитов. Он основан на регистрации изменений светопропускания обогащенной тромбоцитами плазмы. Это позволяет исследовать не только агрегацию, но и изменение формы тромбоцитов. С другой стороны, изменение формы может маскировать начальный этап агрегации. Кроме того, показано, что образование малых агрегатов (менее 100 тромбоцитов) может не сказываться на светопропускании суспензии. В 1989 году З.А. Габбасовым и соавторами был предложен новый метод исследования агрегации тромбоцитов.

Метод основан на анализе флуктуаций светопропускания (ФСП-метод), вызванных случайным изменением числа частиц в оптическом канале. Относительная дисперсия таких флуктуаций пропорциональна среднему размеру агрегатов, и используется для исследования кинетики агрегации. Метод отличается высокой чувствительностью, что делает его пригодным для исследования спонтанной агрегации, агрегации под действием низких концентраций индукторов, а также агрегации субклеточных частиц и макромолекул. Развитие этого методического подхода позволило также измерять концентрацию частиц в перемешиваемой суспензии.

Особенности

• Каждая измерительная ячейка работает независимо: вы можете запустить одновременно несколько измерений;
• Измерения по Борну и среднему радиусу также производятся одновременно: два графика отображаются на экране компьютера в режиме реального времени;
• Анализатор не требует ухода и особого обслуживания;
• Все необходимое поставляется в комплекте: реагентов и расходных материалов в наборе хватит на полгода работы небольшой лаборатории;
• Для работы не нужен мощный компьютер: достаточно любого ПК с предустановленной системой Windows и свободным портом USB;
• Обучение на базе лаборатории Института экспериментальной кардиологии РКНПК МЗ РФ в Москве: даже если вы не являетесь обладателем прибора – приезжайте к нам учиться агрегации;
• Производитель обеспечивает поддержку оборудования даже после истечения гарантийного срока: если мы сможем починить бесплатно – починим бесплатно.

Области применения

• Диагностика состояния тромбоцитарного звена гемостаза;
• Диагностика врожденных и приобретенных нарушений гемостаза;
• Оценка эффективности терапии;
• Скрининг новых лекарственных препаратов;
• Оценка жизнеспособности тромбоцитарной массы при переливании крови;
• Токсикология.

В комплекте с анализаторами агрегации поставляется программное обеспечение. Программа выполняется на IBM-совместимом компьютере в среде Windows. Она отображает кривые агрегации в ходе эксперимента, сохраняет их вместе с временными метками и сопроводительной информацией на диске, и позволяет в дальнейшем их просматривать и обрабатывать.

Анализатор агрегации тромбоцитов лазерный АЛАТ2

Анализаторы агрегации предназначены для исследования агрегации тромбоцитов и других клеток, определения концентрации клеток в суспензии, а также оценки их формы.

Методы определения:

• НОВЫЙ МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ — ОПРЕДЕЛЕНИЕ СРЕДНЕГО РАДИУСА АГРЕГАТОВ*
• ТРАДИЦИОННЫЙ МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ — РЕГИСТРАЦИЯ СВЕТОПРОПУСКАНИЯ ПО МЕТОДУ БОРНА
• НОВЫЙ МЕТОД ИЗМЕРЕНИЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ*

* Защищены патентами России, США и других стран

• Агрегация регистрируется как традиционным турбидометрическим методом , так и недавно разработанным методом, основанным на оценке среднего размера агрегатов в реальном времени.

Турбидометрический метод, предложенный Борном и О’Брайеном, является в настоящее время наиболее распространенным при исследовании агрегации тромбоцитов.

Он основан на регистрации изменений светопропускания обогащенной тромбоцитами плазмы.
Это позволяет исследовать не только агрегацию, но и изменение формы тромбоцитов.
С другой стороны, изменение формы может маскировать начальный этап агрегации.
Кроме того, показано, что образование малых агрегатов (менее 100 тромбоцитов) может не сказываться на светопропускании суспензии.

• В 1989 году З.А. Габбасовым и соавторами был предложен новый метод исследования агрегации тромбоцитов.
Метод основан на анализе флуктуаций светопропускания (ФСП-метод) , вызванных случайным изменением числа частиц в оптическом канале.
Относительная дисперсия таких флуктуаций пропорциональна среднему размеру агрегатов, и используется для исследования кинетики агрегации.

Метод отличается высокой чувствительностью, что делает его пригодным для исследования спонтанной агрегации, агрегации под действием низких концентраций индукторов, а также агрегации субклеточных частиц и макромолекул.
Развитие этого методического подхода позволило так-же измерять концентрацию частиц в перемешиваемой суспензии.

В комплекте с анализаторами агрегации поставляется программное обеспечение.

Программа выполняется на IBM-совместимом компьютере в среде Windows.

Она отображает кривые агрегации в ходе эксперимента, сохраняет их вместе с временными метками и сопроводительной информацией на диске, и позволяет в дальнейшем их просматривать и обрабатывать.

Особенности анализатора агрегации тромбоцитов АЛАТ2:

• Новый высокочувствительный метод исследования агрегации — измерение среднего радиуса — позволяет регистрировать кинетику образования малых агрегатов в реальном времени
• Чувствительность при измерении спонтанной агрегации выше, чем у прибора Бредина
• Два независимых канала; в каждом канале светопропускание и средний радиус агрегатов измеряются одновременно
• Результаты измерений могут регистрироваться с помощью встроенного дисплея или компьютера

Модели анализаторов:

Области применения анализатора АЛАТ2:

• Диагностика состояния тромбоцитарного звена гемостаза
• Диагностика врожденных и приобретенных нарушений гемостаза
• Оценка эффективности терапии
• Скрининг новых лекарственных препаратов
• Оценка жизнеспособности тромбоцитарной массы при переливании крови
• Токсикология

Технические характеристики анализатора агрегации тромбоцитов АЛАТ2:

Счетчик клеток (модели 230LA, 230LA-2):

рабочий диапазон концентраций (для тромбоцитов человека) — 50. 500 тыс./мкл
систематическая погрешность <5%
воспроизводимость (среднеквадратичное отклонение) <5%